间充质干细胞属于成体干细胞 ，可在体表通过分歧的步骤过问下下诱导分化为骨、软骨及其他结缔组织 ，因其起源宽泛 ，分离无创伤 ，较低的免疫原性、成长周期短等特点 ，是组织工程种子细胞的沉要起源。干细胞的诱导分化一方面是干细胞鉴定的重要步骤 ，另一方面也是干细胞职能学钻研的重要蹊径。选取体表前提造就基诱导造就下 ，人间充质干细胞应可能分化为成脂肪、骨、软骨细胞。成骨分化经茜素红染色法鉴定。
尝试前筹备：
试剂：PBS ，成骨诱导分化造就基 ，茜素红
耗材：NEST细胞造就皿 ，NEST通常吸头 ，NEST微量离心管
设备：CO2造就箱 ，显微镜
一、接种骨髓间充质干细胞：
取对数成持久的细胞 ，依照2×105cells/cm2的细胞密度接种至包被后的细胞造就皿中 ，将接种好的细胞造就皿放到37℃ ，5% CO2细胞造就箱造就 ，定期观察细胞增殖状态 ，当细胞融合度达60-70%时 ，弃掉上清 ，参与成骨诱导分化造就基。
二、细胞分化诱导：
每2-3天进行换液（定期观察是否有传染） ，再放入37℃ ，5% CO2细胞造就箱中造就约2-3周 ，并把稳观察细胞状态变动。凭据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况 ，决定终止细胞诱导的功夫 ，进行下一步染色鉴定。
三、细胞固定：
用吸头（确保汲取充分）吸去造就基使用适量1×PBS洗濯一次 ，弃去后取适量4%中性甲醛溶液细胞造就皿底面 ，室温固30-60min ，弃去固定液再使用1×PBS洗濯两次。
四、茜素红染色：
参与适量茜素红染液染3-5min ，吸去茜素红染液 ，用1×PBS洗濯两次 ，并参与适量1×PBS预防细胞干燥。
五、诱导评估：
显微镜下观察成骨染色成效 ，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时 ，钙质结节会与茜素红染料结合后出现红色或橘红色。
图c 间充质干细胞成骨诱导分化,茜素红染色显示钙结节..
