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2022-11-235853 次浏览
造就基配造与贮存

尝试资料:

基础造就基(液体或干粉)                PET/PETG方形试剂瓶[NEST]

血清(通例为FBS/NBS)                   补充剂

移液枪                                              电动移液枪

15mL、50mL无菌离心管[NEST]        灭菌超纯水                     

盒装无菌吸头[NEST]                          血清移液管[NEST]

超净工作台                                        双抗(青链霉素混合液)

杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]       针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]    


尝试筹备:

血清筹备:

配置造就基前一天,将所需血清从-20℃冰库取出,搁置入2-8℃冰箱缓慢解冻贮存,使用前37℃水浴加热。

造就基筹备:

液体基础造就基使用前37℃水浴加热。


尝试流程:

基础造就基配置(干粉):

凭据配置体积,选择相宜的灭菌后容器,在容器中倒入约90%体积的超纯水,将造就基干粉全数倒入该容器中,用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。

搅拌30min使所有成分齐全溶化,待溶液澄清后,凭据说明书参与适当量的碳酸氢钠(分析纯),持续搅拌5-10min至溶化,随后超纯水定容并调节PH值。(过滤会使造就基PH值稍微偏高,所以用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.20-7.30)

使用0.22μm杯式滤器[NEST]或0.22μm针式滤器[NEST]过滤除菌,并依照日常使用规格分装入PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中,2-8℃前提下避光保留备用。【菌检合格后方可使用】


造就基配置:

若含有补充剂,用1000μL无菌吸头[NEST]取出适量预热实现的基础造就基,注入补充剂西猎炜中,将其充分溶化,再将含有补充剂的造就基转移入基础造就基中。

接着依照血清使用比例,用血清移液管[NEST]汲取适量预热实现的血清,注入基础造就基中,盖上瓶盖充分混匀。


双抗参与:

除了特殊筛选系统表,通常正常造就状态下,造就基中不增长任何抗生素。若为预防细菌、真菌传染,或疑惑细胞传染必要断根细菌,能够参与青霉素-链霉素双抗溶液,其造就基中的终浓度为青霉素100U/ml,链霉素为100ug/ml。


造就基保留:

将配置后的齐全造就基2-8℃前提下,避光保留备用;或依照使用需要分装入对应规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中。隔夜或1-2天后观察齐全造就基,溶液澄清通透且无染菌,方可使用。

使用有余的血清,依照渣滓量,可分装入15mL/50mL的无菌离心管[NEST]中(预防血清冻存后膨胀泄露问题,离心管工作体积建议为80%),亦可分装入相宜规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中,并用封口膜封口,-20℃前提下避光保留。


使用到的NEST产品:

15mL、50mL无菌离心管[NEST]           PET/PETG方形试剂瓶[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]                            血清移液管[NEST]

杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]          针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]                     

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