界说：
酶联免疫吸附测定（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上 ，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反映的定性和定量检测步骤。
常用的ELISA能够分为五大类：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争ELISA、竞争抑造ELISA。其他的ELISA都由这五类组合衍生。
所有的ELISA根基由基础的几个步骤组合而成：将抗原或抗体吸附到固相载体上；参与待检样品以及后续试剂；温育；洗涤去掉游离未结合的反映物；参与酶检测底物；了局的判读
分类：
1.直接ELISA
将抗原按肯定的比例稀释 ，包被到固相载体上 ，参与稀释好的特异性的酶标抗体 ，孵育后参与底物显色并判读了局。直接ELISA中只经过了一步信号放大 ，所以其活络度不是很高
2.间接ELISA
间接ELISA与直接ELISA分歧的是 ，与包被好的抗原结合的长短酶标抗体 ，另表再引入第二种抗体（即二抗）。二抗是经过酶标的 ，它能够与第一种抗体特异性结合 ，最后参与底物显色并判读了局。在检测抗体的效价、血清的效价以及单克隆抗体的筛选过程中 ，间接ELISA都是极度沉要的尝试过程。
3.夹心ELISA
3.1直接夹心ELISA
3.1.1双抗体夹心ELISA
将第一种抗体（捕获抗体）包被在固相载体上 ，封关后参与待检抗原 ，温育后参与第二种抗体（检测抗体） ，捕获抗体和检测抗体可所以针对分歧表位的两种单抗 ，也可所以针对统一抗原的一种单抗与一种多抗 ，但是检测抗体必要经过酶标。
3.1.2双抗原夹心ELISA
道理和操作与双抗体夹心ELISA根基一样 ，分歧的是包被的是抗原 ，待检对象是抗体 ，而后参与酶标抗原 ，再加底物显色。双抗原夹心ELISA利用特异性的抗原包办酶标二抗 ，所以特异性比间接法更好。另表 ，由于间接ELISA中使用的二抗通常只能鉴别IgG ，而双抗原夹心ELISA中任何类似的免疫球蛋白都能够被检测出 ，因而 ，双抗原夹心ELISA比间接ELISA也更活络。
3.2间接夹心ELISA
间接夹心ELISA是基于两种分歧种属起源的抗体的夹心ELISA ，其道理是将一各种属起源的特异性抗体包被于固相载体上（作为捕获抗体） ，封关 ，参与待检抗原 ，温育 ，洗涤后参与另一各种属起源的特异性抗体（非酶标 ，作为检测抗体） ，最后参与酶标二抗（特异性鉴别检测抗体） ，再加底物显色。与直接双抗夹心ELISA相比 ，其中引入了特异性鉴别检测抗体的酶标二抗 ，相当于整个别系的信号增长了一步放大系统 ，最终的了局比直接双抗夹心ELISA更活络。
4.竞争ELISA
将特异性抗体吸附于固相载体表表 ，经洗涤后分成两组：一组加酶象征抗原和被测抗原的混合液；而另一组只加酶象征抗原 ，再经孵育洗涤后加底物显色 ，这两组底物降解量之差 ，即为所要测定的未知抗原的量。这种步骤所测定的抗原只有有一个结合部位即可 ，因而 ，对幼分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。
5.竞争抑造ELISA
预先将抗原包被在固相载体上 ，尝试时参与稀释好的待检抗原（或抗体） ，而后顺次参与特异性的抗体以及此抗体对应的酶标二抗。待检标本中的抗原（或抗体）就和预造备系统中固相载体上结合的抗原（或抗体）竞争结合特异性的抗体（或固相载体上结合的抗原）。洗掉被竞争的特异性抗体 ，最后加底物显色。最终显色的了局与待检抗原（或抗体）量呈反比。
尝试资料：
96孔高吸附酶标板[NEST]
10μL/200μL/1000μL吸头[NEST]
单通路移液枪、多通路移液枪
微量离心管[NEST]
显色液（A/B液）
15/50ml离心管[NEST]
洗液（PBST）
终止液（H2SO4）
BSA蛋白
稀释液（PBS）
包被液（CB）
全波段酶标仪
恒温箱
尝试流程：
以使用比力宽泛的间接ELISA为例 ，简述尝试过程
1.抗原包被：
将对应抗原用CB稀释至1ug/ml ，参与96孔酶标板孔中 ，每孔100ul ，4℃包被过夜 ，之后进行下一步骤。若尝试功夫比力严重 ，包被后可搁置恒温箱内 ，37℃包被3h后即可进行下一步操作。
2.洗板：
将酶标板内的包被液甩干 ，用洗液（PBST——0.2%的吐温20 PBS）洗濯酶标板2次 ，并拍干板内液体 ，使之无余液残留。
3.封关：
用PBS充分溶化BSA蛋白造备成封关液（体积比为5~10%） ，将封关液参与酶标板孔中 ，每孔150ul ，恒温箱37℃封关1h。若尝试功夫铺排丰裕 ，可在4℃前提下封关过夜。
【若抗原内含有偶联BSA分子 ，则更换封关成分 ，可用羊血清包办】
4.洗板：
将酶标板内的封关液液甩干 ，用洗液（PBST）洗濯酶标板2次 ，并拍干板内液体 ，使之无余液残留。
【若暂无使用需要 ，可将包被后的酶标板搁置-20℃前提下贮存 ，必要时解冻使用即可。】
5.一抗：
用PBS稀释液将待检样品（含有对应抗原的抗体）按需要稀释 ，再将稀释后样本参与包被好的酶标板中 ，每孔100ul ，阴性对照孔参与100ulPBS稀释液 ，在恒温箱中37℃孵育1h。
6.洗板：
将酶标板内的一抗甩干 ，用洗液（PBST）洗濯酶标板3次 ，并拍干板内液体 ，使之无余液残留。
7.二抗：
用PBS稀释液依照注明 ，稀释对应的酶标二抗 ，将稀释实现的二抗参与一抗孵育实现的酶标板中 ，每孔100ul ，恒温箱37℃孵育30min。
8.洗板：
将酶标板内的二抗甩干 ，用洗液（PBST）洗濯酶标板4次 ，并拍干板内液体 ，使之无余液残留。
9.显色：
将显色液A/B液等体积混合 ，配置成显色液 ，参与二抗孵育实现的酶标板中 ，每孔100ul ，恒温箱避光37℃反映5~10min。
【显色液现配现用 ，不成提前配置】
10.终止与读数：
显色实现后 ，毋庸抛弃显色液 ，直接参与终止液（H2SO4）终止反映 ，每孔50ul ，随即转移至全波段酶标仪450nm单波长度数 ，或450nm/620nm双波长读数 ，想书实现后处置数据。
使用到的NEST产品：
96孔高吸附酶标板[NEST]
10μL/200μL/1000μL吸头[NEST]
微量离心管[NEST]
15/50ml离心管[NEST]
